ARTEMIZINĪNA SATURS ARTEMISIJAS GADA LĪDZEKĻA EKSTRAKTIEM, KAS IEGŪTI DAŽĀDĀM METODĒM t Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Padnaeed Buryat State University, st. Smolīns, 24a, Ulan-Ude (Krievija) Tomskas Valsts universitāte, 36, Lenina Ave., Tomsks (Krievija) Baikāla dabas pārvaldības institūts, Krievijas Zinātņu akadēmijas Sibīrijas filiāle, ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Krievija)

Tiek izskatīti jautājumi par artemizinīna izolāciju no Artemisia annua L. un tā kvantitatīvo noteikšanu, izmantojot HPLC-MS metodi. Artemizinīnu izolēja ar dažādām ekstrakcijas metodēm: macerāciju, ultraskaņu un subkritisko CO2 ekstrakciju. CO2 un heksano ekstraktu komponentu sastāvu pētīja ar GC-MS.

Ievads

Artemizīns (1) ir peroksīda sesquiterpene [1], kas ir ļoti efektīvs pretmalārijas līdzeklis un spēcīgāku savienojumu prekursors, piemēram, artēmers, artesunāts un daži citi. Artemizinīna un tā atvasinājumu nozīme ir balstīta uz ļoti ātru šāda veida savienojuma iedarbību pret tā galveno patogēnu Plazmodium falciparum, kas arī izraisa smadzeņu slimību. Artemizinīna ķīmiskā un bioķīmiskā sintēze ir izrādījusies ļoti dārga un līdz ar to patlaban nav dzīvotspējīga kā galvenais artemizinīna ražošanas avots [2].

Malāriju izraisa mikroorganisms - Plasmodium malaria. Cilvēka organismā ir 4 šāda veida plazmodija, parazītiski: Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae un P. falciparum. 20. gadsimta vidū, pateicoties plaši izmantotajam hinīnam un tā atvasinājumiem, bija iespējams būtiski samazināt malārijas pacientu skaitu. Tomēr kopš 60. gadiem. pagājušā gadsimta malārija atkal atgādināja par sevi. Tas notika tāpēc, ka Taizemē un Dienvidamerikā malārijas Plasmodium (P. falciparum), kas ir rezistents pret hinīnu, hlorokvīnu, meflokīnu un citām hinolīnu saturošām zālēm, parādījās un izplatījās citos reģionos [3, 4]. Aktualitāte ir kļuvusi par problēmu, kas saistīta ar jaunu efektīvu pretmalārijas medikamentu, tostarp artemizinīna, meklēšanu. Šis unikālais savienojums tika atklāts Ķīnā (Ķīnas nosaukums ir qinghaosu). Darbi tika uzsākti 1967. gadā un tika saukti par “Programmu 523” [5]. Tā ir izolēta no ikgadējās Atemisia annua L. vērmeles, kas tiek izplatīta bijušās PSRS teritorijā, aptverot Altaja, Transbaikalia, Amūras reģionu, Kazahstānu, Kirgizstānu, Uzbekistānu un Turkmenistānu. Ķirzaka ir plaši pārstāvēta Ķīnā un citās valstīs [6]. Kopējais artemizinīna daudzums, kas izolēts no dažādām A. annua daļām, ir aptuveni 0,01 un 1,4% no sausās lapas masas [2].

Artemisia annua L. ir galvenā izejviela artemizinīna ražošanai. Pasaules Veselības organizācija 2001. gadā ieteica izmantot artemizinīnu pirmās līnijas terapijā malārijas kontrolei, kā rezultātā palielinājās platība zem viena gada veca vērmeles. Visbiežāk kokgriezumu ik gadu audzē Austrumāzijā, galvenokārt Ķīnā un Vjetnamā (70% no pasaules krājuma platības), kas nesen tika ieviesta kultūrā Austrumeiropā un Dienvidāfrikā (20% no pasaules krājuma platības), kas nodrošina ceturtdaļu no globālajām veselības vajadzībām [7].
Papildus artemizinīnam A. annua tiek novērtēta par ēterisko eļļu, kurai piemīt raksturīgs salds, zaļais aromāts un tiek izmantots parfimērijas un kosmētikas līdzekļos. Turklāt eļļai piemīt antibakteriālas īpašības un to var izmantot ādas slimību ārstēšanai. Papildus sesquiterpene laktoniem, kuriem ir galvenā terapeitiskā vērtība, šī auga ēteriskās eļļas satur ievērojamu daudzumu sastāvdaļu, kuru vērtība ir, piemēram, 1,8-cyneols, artemisia alkohols un ketons, borneols un citi, nesen pētīta viena gada tārpu taukskābju sastāvs, un analizēja arī lipofīlo ekstraktu fizioloģisko iedarbību uz ādu [2].
Saistībā ar bioloģiski aktīvo vielu bagātīgo un daudzveidīgo sastāvu, kas atrodas Artemisia annua, ir liela interese par jaunu ikgadējo vērmeles augšanas jomu meklēšanu. Burjatijas Republikā palielinās 46 polinuma sugas [8], ieskaitot Artemisia annua L. Artemidīna saturs Polijā, kas ir viens gads vecs, aug Buryatia, nav iepriekš pētīts. Tāpēc šī darba mērķis bija artemizinīna kvantitatīva noteikšana ekstraktos, kas iegūti ar dažādām ekstrakcijas metodēm.

Eksperimentālā daļa

Izpētes izejmateriāls tika izvēlēts virs Polijas ikgadējās Artemisia annua L. daļas, kas savākta 2010. gada augusta pirmajā desmitgadē ziedēšanas fāzē.
Artemizinīna un citu bioloģiski aktīvo vielu (ēteriskās eļļas) izolēšana tika veikta, izmantojot dažādas ekstrakcijas metodes: macerāciju, ultraskaņas ekstrakciju un subkritisko CO2 ekstrakciju. Ekstrakcija tika veikta laboratorijas iekārtās. Kā ekstrakcijas līdzekļus izmantoja heksānu, etilacetātu, etanolu un CO2. Dati un ekstrakcijas parametri ir parādīti 1. tabulā. No nogulsnēm iegūtie ekstrakti tika atdalīti, centrifugējot OP-8UHL4.2 centrifūgā pie 5000 apgr./min. Un pēc tam filtrē caur paraugu filtrēšanas sistēmu.
Artemizinīna kvantitatīvo noteikšanu noteica HPLC-MS, izmantojot Finnigan Surveyor augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfu, kas aprīkots ar autosampler Plus autosampleri un LC Pump Plus sūkni ar LCn Advantage MAX (jonu slazdu) Finnigan detektoru, jonizācijas metode - elektropiesārņojums. Kolonna "Hypersyl Gold" 150 × 4 mm, piepildīta ar silikagēla sorbentu ar C18 potētām fāzēm (daļiņu izmērs 5 μm), (ražo Thermo electronic Corporation, ASV). Eluācija tika veikta izokrātiskā režīmā (50% (A): 50% (B)), sākuma buferšķīduma (A) sastāvs bija skudrskābes ūdens šķīdums (pH = 3) + 2 ml piesātināta amonija acetāta šķīduma, eluēšanas buferis (B) - 100% acetonitrila. Eluenta tilpuma plūsmas ātrums ir 0,5 ml / min, injicētā parauga tilpums (automātiskais paraugs) ir 25 μl. Jonu reģistrācija tika veikta pozitīvi uzlādētu jonu (Selected Ion Monitoring, SIM) monitoringa režīmā ar molekulmasu 300 (sakarā ar amonija jonu NH4 pievienošanu artemisinīna molekulai) ar loga platumu (299-301) m / z. Kvantitatīvā noteikšana tika veikta, izmantojot iekšējo standarta metodi, izmantojot valsts standarta paraugu no Sigma.

Ekstrakcijas metodes un parametri

Nr. P / p Ekstrakcijas metode Ekstrakts Ekstrakcijas laiks / ekstrakcijas parametri Artemizīna saturs%, izteikts a.s.s.
1 Etanola 24 h / izejvielu macerēšana: šķīdinātāja attiecība (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Makerēšanas etanols 48 h / izejvielas: šķīdinātāja attiecība (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Heksāna makerēšana 24 h / parauga attiecība: šķīdinātājs (1: 5) 0,039 ± 0,002
4 Ultraskaņas ekstrakcija etanols 15 min / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), skanēšanas frekvence 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultraskaņas ekstrakcija etilacetāts 15 min / izejvielas: šķīdinātāja attiecība (1: 5), skanēšanas frekvence 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-ekstrakcija so2 24 h / plūsmas ātrums 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003

Turklāt CO2 un heksāna ekstraktu gaistošās sastāvdaļas tika pētītas ar hromatogrāfijas masas spektrometriju, izmantojot Agilent Packard HP 6890 gāzes hromatogrāfu ar MSD 5973N kvadrupola detektoru. Mēs izmantojām 30 metru kvarca kolonnu TR-5 ms ar iekšējo diametru d = 0,25 mm, plēves biezumu 0,25 μm. Hromatogrāfiskā atdalīšana tika veikta, kā aprakstīts [9]. Kvalitatīvi ekstraktu komponenti tika noteikti, salīdzinot pilnu masas spektru ar augu izcelsmes hromatogrāfijas masas spektrometrisko datu bibliotēkas datiem. Tkachev, bibliotēkas NIST 08 un Wiley 275. Analīzes rezultāti ir parādīti 2. tabulā.

CO2 un heksāna ekstraktu galvenās sastāvdaļas
Maksimālais relatīvais laukums Savienojumi Maksimālais relatīvais laukums
CO2-ekstrakta heksāna ekstrakta savienojumi
CO2 ekstrakts Heksāna ekstrakts
Monoterpenoīdi ilgi ķēdes ogļūdeņraži
Triciklilēns 140181 - tricāns 103969 52288
a-pinejs 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-pentakozāns 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptakozāns 279800 132358
3-caren

Cikliskie ogļūdeņraži
Limonen
Pentacyclo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7.5.0.0 (2.8).0 (5.14) 0).
1,8-cineols 133599 - (7.11)] tetradekāns
Artemisia ketons 1413437 - 1,8-dimetilfenantēns 3765681 1080289
Borneols 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornyla acetāts

Diterpenoīdi
Sesquiterpenoids
Metil 3,5-bis (etilamino) benzoāts 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -

Karyofillen oksīds
Germacren D 214913 -
R-Selinene 3053333 328535
a-kadinols 149485 -

Rezultātu apspriešana

Kā redzams no 1. tabulā sniegtajiem datiem, zemākais artemizinīna iznākums bija (0,022%) ar ultraskaņas ekstrakciju ar etilacetātu. Artemizinīna saturs ekstraktos, kas izolēti ar ultraskaņas ekstrakciju un macerāciju, izmantojot dažādus šķīdinātājus (heksāns, etilspirts), nav būtiski atšķirīgs 0,038-0,040% pēc A. p. Pieprasot ar etilspirta vērmeles ikgadējo 24 un 48 stundu laikā, iegūto ekstraktu artemizinīna saturs ir aptuveni tāds pats kā 0,040 un 0,038%. Lielākā artemizinīna (0,054%) ieguve tika iegūta pirmskritiskā CO2 ekstrakcijas laikā. Salīdzinājumam, mēs sniedzam dažus datus par artemizinīna saturu viengadīgajā vērmeklī, kas aug dažādās teritorijās. Artemisia annua L., kas aug dažādās Ķīnas daļās, satur 0,01 līdz 0,22% artemizinīna. Daži Ķīnā un Vjetnamā audzētu ikgadējo vērmeles hibrīdi satur 1,0–1,5% artemizinīna [10]. Bijušās PSRS teritorijā augošajā A. annuā esošā artemizinīna saturs ir šāds (vērtības norādītas kā sausnas sausnas): Gruzijas PSR (0,005%), Kirgizstānas PSR (0,025%), Moldovas PSR (0,01-0,02%), Krasnodaras teritorija (0,04%), Ukrainas PSR (0,005-0,05%), Turkmenistāna (0,05% a.s.c.), Kazahstāna (0,01-0,05% no A.S.S.) [11].
Pētot ikgadējo vērmeles ekstraktu, kas iegūts ar CO2 ekstrakciju un macerāciju, pētot heksānu kā ekstraktu, hromatogrāfijas masas spektrometrija atklāja būtiskas atšķirības šo ekstraktu sastāvā. Monoterpenoīdus, sesquiterpenoids, garo ķēžu ogļūdeņražus, cikliskos ogļūdeņražus un diterpenoīdus nosaka ar masas spektrometrijas metodi.
Monoterpenīdus var atrast tikai CO2 ekstraktā. CO2 ekstrakta galvenās sastāvdaļas ir a-pinīns, 3-karēns, artemizu ketons, (3-selenēns, tricozen-1, 1,8-dimetilfenantēns un fluorēns).

Heksāna ekstrakts, ko iegūst, izmantojot ikgadējo gāzu hromatogrāfijas-masas spektrometriju, tika identificēti galvenokārt garo ķēžu ogļūdeņraži un cikliskie ogļūdeņraži, 3-selenēns tika konstatēts no sesquiterpenoids.
Papildus artemizinīnam, kas ir primāras medicīniskas vērtības, ēteriskā eļļa satur daudz bioloģiskās vērtības sastāvdaļu, piemēram, artemizas ketonu, 1,8-cyneolu, borneolu utt.

Secinājumi

1. Artemizinīna saturs dažādos A. annua ekstraktos (antenas daļā, ziedēšanas fāzē), kas aug Burjatijas Republikas teritorijā, tika noteikts ar HPLC-MS.
2. Maksimālais artemisinīna saturs ir atrodams CO2 ekstraktā (0,054% a.s.c. izteiksmē),
3. Ar hromatogrāfijas masas spektrometrijas palīdzību tika pētīta ēteriskās eļļas sastāvs, kas ekstrahēts ar dažādām ekstrakcijas metodēm.

Artemisia annua L.
Taksona apraksts

Krievu vārdi

Sistemātika

Attēli

Augi kartē

Botāniskais apraksts

Artemisia annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. Nouvā. Mem. Soc. Nat. Mosc. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; Ldb. Fl. Ross. II, 592; Boiss Fl. vai. III, 371; Maxim Bull. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Āķis Fl. Br. Ind. III, 323; Kom fl. Manch. III, 659; Nakai, Fl. Korejiešu valoda. II, 30; Fedch. Saraksts var. Turk IV, 200; Rydb. North Am. Fl. 34, 3. daļa, 259; Pampan Nuovā. Giorn. Bot. Ital. n.s. XXXIV, 637; Hall un Clem. Artems (1923) 102; Kom un alice. Izvēlēties. var. Tālie Austrumi kr. II, 1036; Krasheninn. fl. dienvidaustrumos Europ PSRS daļa, VI, 357; Grossg. Fl. Kavk. IV, 138; Krasheninn. un spārni. Fl. Zap Sib. XI, 2816; Pole Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. Tr. Pēterburgā bots Dārzs, X, 87; Fedch. cit. cit. - Ic.: Amm. Stirp. rar. t. 193, f. 23; Gmel. Fl. sib. II cilne. 25. - Exs: ГРФ № 3152. - Vienu gadu vērmeles.

Gada Augs ir smaržīgs, zaļš, tukšs vai izkaisīti, mazi, blakus esoši mati, ar taisnu, rievotu, brūnu vai purpura-brūnganu kātiņu 30–100 cm. lapas ir dotted-fossa-ferruginous, apakšējā petiolate, 3-5 cm garš. un 2-4 cm platas., ovālas, trīsreiz virsmas, pēdējās kārtas segmenti, iegareni, īsi vērsti; viss vai ar 1-2 zobiem, 1-2 mm garš. un 0,5 mm plata; vidējās un stumbra lapas ir dubultas, augšējās sēžas, mazākas un mazāk sarežģītas, augšējie stiprinājumi ir vienkārši vai ar nelielu sānu cilpu skaitu. Korpusi ir sfēriski, 2-2,5 mm plati, daudzi, noraidīti vai lēni, uz īsām kājām, kopā ar īsiem atzariem, b. m. garš, piramīdas panikulu ziedkopas; iesaiņojums ir gluds, ārējās brošūras ir lineāri iegarenas, zaļas, iekšējas ovālas vai gandrīz apaļas, ap malām ir gluda, gluda robeža; tvertnes izliekums, tukšs; margināli ziedi, skaits 10–20, kronis, dot-dziedzeris, šauri lineāri, stigma, līkumi, pakļauti no caurules; diska ziedi ir biseksuāli, 12–30 numuri, šaurā pārsega cauruļveida, kaili; putekšņi šauri lineāri, augšējie papildinājumi, iegareni, akūti leņķi, bazālie daivas ļoti īsi, norādīti; kolonna ir īsāka par putekšņiem, stigmas stigma ir lineāra, taisna, nedaudz novirzīta, cilīcija virsotnē; achenes 0,8–0,6 mm garas, iegarenas ovālas, plakanas, virsotnē ar nelielu noapaļotu platformu, tikko grieztas gar margu. Krāsa VIII - IX.

Neredzīgās vietās netālu no mājām, dārziem, dārzos. - Eiropa. h.: ​​Augšdņestra., Augšdņepru., Volzh. Don., Volga., Lejas. Don., Black., Bess., Krima; Kaukāzs: rietumu un austrumu. Trans., Tal., Trešdiena Āzija: Aral-Casp., Balkh., J.-Tarbs, Tien-Shan., Syr-Dar., Pam. - Al., Amu-Dar., Horns. Turk Kopā var.: Tre Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Irāna, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongolija, Ziemeļi. Amerika (svešzemju).

Skats ir Ammana un Gmelina zīmējumi.

Khoz. vērtību Ēteriskās eļļas raža ir 0,1–0,64% (pēc Goryaev). Saskaņā ar Joshikazu Imade (1937), cineols un viela C10H6O atrodas eļļā; šo vielu ir sīki pētījušas Ashania un Joshitomi (1917); kopā ar artemacyaketon, tā izomērs, isoartemisieacetons, tika atrasts eļļā. Šis ketons spēja izolēt no mātes šķīduma, kas palika artemacyacetone semikarbosona pagatavošanā. Seisi Takagi (1928), turpinot japāņu A. annua pētījumus, uz četriem naftas produktiem pazīstamajiem komponentiem pievienoja vēl divus jaunus: cadinene un karyophillen. Balstoties uz Rutovska un Vinogradova (1929) pētījumiem, eļļa sastāv no α-pineļa, cyneola, kampēna, artemidiaketona un izoartemidezona, neliela daudzuma borneola, etiķskābes un sviestskābes, kimuno aldehīda (iespējams, semikarbosona) un fenola (iespējams, eugenola). Pazemes daļās tika konstatēts neliels daudzums alkaloīdu (Lazurievsky, Sadykov, 1939; Massagetov, 1947). Saskaņā ar novērojumiem šajā jomā (Yunatov, 1954), zaļajā stāvoklī dzīvnieki neēd. Alkaloīdu klātbūtni apstiprina M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).

Anotācija un disertācija par zālēm (04/14/02) par tēmu: Artemisia annua L. un Artemisia sieversiana Willd farmakoloģiskais pētījums. Burjatijas floru

Promocijas darba anotācija medicīnā par tēmu Artemisia annua L. un Artemisia sieversiana Willd. Burjatijas floru

Kā manuskripts

Soktoeva Tuyana Erdemovna

FARMAKOGNOSTIKAS PĒTNIECĪBAS ARTEMISIJA ANNUA L. UN ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. BURYATIJAS FLORA

04/14/02 - farmaceitiskā ķīmija, farmakognozija

Promocijas darba kopsavilkums par farmaceitisko zinātņu kandidātu

Disertācijas darbs tika veikts Krievijas Federācijas Izglītības un zinātnes ministrijas Federālās valsts budžeta augstākās profesionālās izglītības „Buryat State University” izglītības iestādē un Krievijas Zinātņu akadēmijas Krievijas Zinātņu akadēmijas Sibīrijas filiāles Baikāla institūta izveidē.

Vadītājs: Ķīmijas zinātņu doktors, profesors

Radnaeva Larisa Dorzhievna

Oficiālie pretinieki: Bioloģijas zinātņu doktors, profesors

Antsupova Tatjana Petrovna

Farmaceitisko zinātņu kandidāts Mongolov Hanhai Purbuevich

Vadošā organizācija: Permas valsts

Krievijas Federācijas Veselības un sociālās attīstības ministrija

Aizsardzība notiks 2011. gada 23. decembrī pie 10 ° oh disertācijas padomes DM 003.028.02 sēdē SB RAS Vispārējās un eksperimentālās bioloģijas institūtā adresē: 6, Sakhyanova St., Ulan-Ude, 670047.

Promocijas darbs ir pieejams SB RAS Buryat Zinātniskā centra Centrālajā zinātniskajā bibliotēkā.

Kopsavilkums publicēts 2011. gada 22. novembrī.

Promocijas padomes zinātniskais sekretārs Bioloģisko zinātņu kandidāts

VISPĀRĒJS DARBA RAKSTUROJUMS Tēmas atbilstība. Artemisia ģints (vērmeles) augi ir daudzsološi bioloģiski aktīvo vielu avoti, piemēram, tarragonu vērmeles Artemisia dracunculus L., vērmeles Artemisia absinthium L., tārpu Artemisia vulgaris L. plaši izmanto tautas, tradicionālajā medicīnā un pārtikas rūpniecībā. Artemisia annua L., ikgadēja vērmele, tika veiksmīgi ieviesta kultūrā daudzās valstīs, un 2001. gadā PVO ieteica to kā galveno artemizinīna avotu - pirmās kārtas ārstēšanu malārijai. Šodien valstis, kas ražo artemizinīnu, nodrošina aptuveni ceturto daļu no globālajām veselības vajadzībām (Tolstikova, 2010; Xiao Wang, 2011). No viena gada vecuma tika izolēti 137 bioloģiski aktīvie savienojumi, tai skaitā 40 sesquiterpenes, 10 triterpēni, 7 kumarīni, 46 flavonoīdi, kas var kalpot par pamatu zāļu izstrādei (Bhakuni, 2001). 20. gadsimta 80. gados zinātnieku grupa (Schroeter, 1989) CISA (Maskavā) mēģināja audzēt PSRS viena gada floras savvaļas audzēšanas posmu. Mūsdienās Tomskas Valsts universitātē tiek veikti nozīmīgi darbi pirmā gada posteņa ieviešanai. Burjatijā n ikgadējā ir savvaļas augu suga.

Kopā ar ikgadējo parazītu Burjatijā, Sivers wormwood Artemisia sieversiana Willd ir plaši izplatīta, kas ir arī daudzsološa suga. Seaberas zāle satur flavonoīdus, ēterisko eļļu, kumarīnus (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009). Siveru ēteriskā eļļa ir svarīga kā hamazulēna avots, netoksisks savienojums ar pretiekaisuma, baktericīdiem, reģeneratīviem efektiem (Berezovskaya, 1991; Khanina, 1992).

Līdz šim detalizēts Bursaja ikgadējās floras Sērijas tārpu un vērmeles ķīmiskais pētījums nav veikts kā daudzsološs bioloģiski aktīvo vielu avots, tāpēc viņu pētījums ir steidzams uzdevums.

Mērķis: Sivers vērmeles Artemisia sieversiana Willd farmakoloģiskais pētījums. un vērmeles ikgadējais Artemisia annua L. kā vērtīgs bioloģiski aktīvo vielu avots.

Lai sasniegtu šo mērķi, ir nepieciešams atrisināt šādus uzdevumus:

1. Identificēt Siversas un P. viena gada vecuma gaisa daļas anatomiskās un diagnostiskās pazīmes, lai noteiktu tirdzniecības rādītājus

izejvielas, novērtē rezerves un iespēju novākt vienu gadu un S. Siversas Burjatijas Republikas teritorijā;

2. Izpētīt šo augu bioloģiski aktīvo vielu galveno grupu ķīmisko sastāvu un noteikt to kvantitatīvo saturu, noteikt ēterisko eļļu un artemizinīna lokalizāciju atsevišķās augu daļās, pētīt to uzkrāšanās dinamiku attīstības fāzēs un noteikt optimālos savākšanas apstākļus;

3. Izstrādāt metodi artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai viena gada vecumā;

4. Noteikt bioloģisko aktīvo vielu satura kvalitātes rādītājus un standartus, izstrādāt zāļu dokumentācijas normatīvo dokumentāciju - Sivers vērmeles zāli un ikgadējo vērmeles zāli.

Zinātniskā novitāte. Tika izveidotas Siversas un P. gada zāles zāles diagnostikas galvenās iezīmes, izstrādāti skaitliskie rādītāji, kas nepieciešami izejvielu standartizācijai.

Tika veikts pētījums par Sivera zāle un viena gada zālāja ķīmiskais sastāvs. Tika noteikts ēterisko eļļu, flavonoīdu, taukskābju, makro un mikroelementu saturs. Flavonoīdi - luteolīns-7-glikozīds, rutīns, kvercetīns un hryoeriols šajos augos tika konstatēti ar HPLC-MS metodi. Galvenās taukskābes pētītajos vērmeles veidos ir palmitīnskābe, linolskābe, linolēns, 10% oktadekēnskābe ir atrodama arī nozīmīgajā vērmeles.

Nosaka nosacījumus artemizinīna ekstrahēšanai (ekstrakcijas veids, ekstrakcijas metode, ekstrakcijas laiks) no gada garšauga un tika konstatēts, ka maksimālā artemizinīna ekstrakcija tiek panākta ar ultraskaņas un subkritisko CO2 ieguvi. Ar HPLC-MS ir konstatēts, ka lielākais artemisinīna daudzums viena gada vecumā ir ziedkopības ziedēšanas fāzē.

Pētīja ēteriskās eļļas uzkrāšanās dinamiku atkarībā no attīstības fāzes un augu daļas. Vislielākais daudzums hazazulēna ēteriskās eļļas p. Siversa uzkrājas ziedu ziedēšanas un ziedēšanas fāzēs.

Noteiktos dokumentos iekļauti noteiktie BAS kvalitātes rādītāji.

Praktiska nozīme. Sivera norēķinu rezerves un iespējamais ikgadējais iepirkuma apjoms un viena gada norēķini Burjatijas Republikas teritorijā (Siversas apmetne - no 0,1 līdz 73,7 tonnām gadā un viena gada norēķins - no 1,2 līdz 122,3 tonnām gadā).

Ir izstrādāta metode artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai p. Grass ar gada HPLC-MS metodi. Zinātniski pamatoti ir izejvielu paraugu sagatavošanas apstākļi artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai.

Ir veikta izejvielu standartizācija, izstrādāti FS projekti - „Sivers Wormwood Herbal” un „Wormwood One-Year Grass”.

Īstenošanas pakāpe. Ēterisko eļļu un mikroskopisko analīžu datu ieguves metode tika pārbaudīta un ieviesta Federālās valsts augstākās profesionālās izglītības valsts budžeta iestādes Buryat State University Farmācijas departamenta izglītības procesā (2011. gada 6. septembra Īstenošanas likums Nr. 1). FS projekti par Sivers vērmeles zāli un viena gada vērmeles ir sagatavoti atlīdzībai.

Aizsardzībai tiek izņemti:

• Burjatijā augošo Sivera un P. anatomiskās struktūras, krājumu, autentiskuma kritēriju izpētes rezultāti;

• bioloģiski aktīvo vielu ķīmiskās izpētes rezultāti un to sezonālā uzkrāšanās dinamika;

• Siversas zemes virsmas standartizācijas pētījumu rezultāti, p.

Darba aprobācija. Promocijas darba galvenie noteikumi tika prezentēti un apspriesti: zinātniski praktiskā konferencē ar starptautisku līdzdalību „Tradicionālās medicīnas attīstība Krievijā: pieredze, pētniecība, perspektīvas” (Ulan-Ude, 2010); 7. ziemas simpozijs par ķīmometriju "Mūsdienu datu analīzes metodes" (Sanktpēterburga, 2010); starptautiskā zinātniskā konference, kas veltīta Burjaatas Valsts universitātes 15.gadadienai "Baikālas Āzijas faktiskās studijas" (Ulan-Ude, 2010); V starptautiskā zinātniski praktiskā konference "Baikāla reģiona attīstības prioritātes un iezīmes" (Ulan-Ude, 2011); X starptautiskā zinātniski praktiskā konference "Dienvidsibīrijas un Mongolijas botānikas problēmas" (Barnaula, 2011); IV. Visu krievu konference "Jauni sasniegumi augu materiālu ķīmijā un ķīmiskajā tehnoloģijā" (Barnaula, 2009); XVI Starptautiskā studentu, maģistrantu un jauno zinātnieku konference "Lomonosova-2009" (Maskava, 2009); XV Starptautiskā ekoloģiskā studentu konference "Krievijas un blakus esošo teritoriju ekoloģija" (Novosibirska, 2010); II Visu krievu studentu, maģistrantu un jauno zinātnieku zinātniskā-praktiskā konference "Ķīmijas, biotehnoloģijas un pārtikas rūpniecības tehnoloģijas un aprīkojums" (Biysk, 2009); Visu krievu zinātniskā-praktiskā konference "Veģetācija

Baikāla reģions un blakus esošās teritorijas ”(Ulan-Ude, 2011); V Krievijas jauno zinātnieku skolu seminārs “Reģiona ilgtspējīgas attīstības problēmas” (Ulan-Ude, 2009); reģionālā jaunatnes zinātniskā-praktiskā konference ar starptautisku līdzdalību "Videi draudzīgas un resursu taupīšanas tehnoloģijas un materiāli" (Ulan-Ude, 2010).

Darbs tika veikts kā daļa no pētniecības projektiem: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Vidusāzijas bioloģiski aktīvo savienojumu biosintēzes biogenētisko modeļu izpēte" (2008-2009), 08-04-98037-r_sibir_a "Augu ķīmiskais sastāvs kā indikators Baikāla reģiona ekosistēmu stāvoklis ”(2008-20 Yugg,); starpdisciplinārs integrācijas projekts Nr. 93 "Pētniecības attīstība medicīnas ķīmijas un farmakoloģijas jomā kā zinātniskais pamats vietējo narkotiku attīstībai"; kopīgs projekts ar Mongolijas Zinātņu akadēmiju "Jaunu lipo un nanosomālu zāļu formu iegūšana, izmantojot dabiskas izejvielas"; RFBR: 10-03-16001-mob_ros "Jauno zinātnieku mobilitāte" (2010), 11-03-90705-mob_st jauno Krievijas zinātnieku zinātniskais darbs (apmācība) vadošajās Krievijas Federācijas zinātniskajās organizācijās 2011 (2011).

Publikācijas. Pēc rezultātiem tika publicēti 17 zinātniskie raksti, no kuriem 3 tika publicēti Krievijas Federācijas Aizsardzības un zinātnes ministrijas Augstākās atestācijas komisijas ieteiktajos periodiskajos izdevumos.

Promocijas darba apjoms un struktūra. Promocijas darbs tiek prezentēts uz 172 lappusēm no rakstāmmašīnas teksta un ietver ievadu, literatūras apskatu (1 nodaļa), eksperimentālo daļu (4 nodaļas), vispārīgus secinājumus, literatūras sarakstu un lietojumprogrammas. Darbs ilustrēts ar 37 tabulām un 61 attēlu. Bibliogrāfiskais indekss ietver 139 avotus, tai skaitā 42 ārvalstu.

Ievadā tiek pamatota tēmas atbilstība, formulēts pētījuma mērķis un uzdevumi, prezentēta darba zinātniskā novitāte un praktiskā nozīme.

Pirmajā nodaļā (literatūras apskats) sniegti dati par ķīmisko sastāvu, farmakoloģiskās aktivitātes spektru, Artemisia L. ģints izmantošanu tradicionālajā un mūsdienu medicīnas praksē.

Otrajā nodaļā (materiāli un metodes) sniegti dati par studiju objektiem, izmantotajām metodēm, ierīcēm un reaģentiem, citu metodoloģisko informāciju.

Trešajā un ceturtajā nodaļā sniegti dati par Severs S un viena gada vecuma anatomisko un diagnostisko pazīmju izpēti. Pēc metodes

UV spektrofotometrija noteica flavonoīdu un tanīnu kopējo saturu pētījuma objektos. Ar GC-MS palīdzību tika pētīta ēteriskās eļļas un vērmeles taukskābju kvalitatīvais un kvantitatīvais sastāvs. HPLC-MS metode noteica flavonoīdu kvalitatīvo un kvantitatīvo saturu. Augu elementu sastāvu noteica ar AAS metodi. Ir izstrādāta un ierosināta artemizinīna satura kvantitatīva noteikšanas metode. ar HPLC-MS. Turklāt mēs pētījām piecu veidu poliestera ēterisko eļļu ķīmisko sastāvu, kas visbiežāk sastopamas Burjatijas un Mongolijas teritorijā - Gmelin Artemisia gmelinii Web tārps. et Stechm., vērmeles, pelēks Artemisia glauca Pall, ex Wild., vērmeles, lielkrāsains Artemisia macrocephala Jacq. bijušais Bess., Sievers tārps Artemisia sieversiana Willd. un Artemisia annua L.

Piektajā nodaļā sniegti dati par viena gada vecā Sivera un P. garšaugu standartizāciju, kas tiek piedāvāti kā daudzsološi chamazulēna un artemizinīna avoti.

Darba galvenais saturs

Pētījuma objekti un metodes. Pētījuma priekšmeti bija Sivera zāles paraugi un ikgadējie ciemati, kas savākti dažādos Burjatijas apgabala rajonos (Ivolginsky, Pribaikalsky, Selenginsky, Tunkinsky, Zakamensky, Kurumkansky) no Irkutskas apgabala (Olkonas sala) un Mongolijas (Selenginsky Aimak) no 2008. gada. līdz 2011. gadam

Mikroskopiskā analīze tika veikta saskaņā ar rakstu "Mikroskopiskās analīzes metode" (GF XI, 2. izdevums) par mikroskopiem (Lomo, Krievija) ar okulāru 10x; 4x, 10x, 40x un MS-300 (TFXS), luminiscences sistēmas komplekts (Micros, Austrija) ar okulāru 10x; 4x, 10x, 40x objektīvi. Izejvielu ražu noteica, izmantojot grāmatvedības vietu metodi.

Ēteriskās eļļas ieguve tika veikta ar hidrodistilāciju, ekstrakti iegūti ar ultraskaņas ekstrakciju, CO2 ekstrakciju un macerāciju.

Šo objektu kvalitatīvā un kvantitatīvā sastāva izpēte tika veikta ar šādām metodēm - GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV spektrofotometrija un AAS. Kromatogrāfijas spektrometriskā analīze tika veikta ar Agilent 6890 gāzes hromatogrāfu ar HP MSD 5973N kvadrupola masas spektrometru (Agilent Technologies, ASV; kolonnas: HP-5ms, g = 0,25 mm, plēves biezums 0,25 μm (kopolimērs - 5%, difenils - 95% dimetilsiloksāna) un DBWax ar iekšējo diametru 0,25 μm, nesējgāzi - hēliju, g) plūsmu 1–1,5 ml / min; HPLC-MS analīze tika veikta ar augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfiem Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, ASV) un Agilent 1200 (Agilent Technologies,

ASV) ar masveida selektīvu detektoru “LCQ Advantage MAX” (“ion trap”) zīmolam „Finnigan” (Thermo Scientific, ASV) un ar tandēma masas spektrometrisko detektoru („jonu slazds”) 6330 (Agilent Technologies, ASV), metode jonizācijas elektropiesārņojums; apstākļi: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikroni, 150x4 mm kolonnas (Thermo electronic Corporation, ASV) un Zorbax Eclipse C18, 5 mikroni, 4,6 * 150 mm (Agilent Technologies, ASV), eluenta plūsmas ātrums 0,5 ml / min. TLC analīze tika veikta ar Sorbfil PTSH-P-A-UV plāksnēm (Imid Ltd, Krievija); BC analīze tika veikta ar FN 6 papīru (Filtrak, Vācija); Absorbcijas spektri tika reģistrēti StellarNet Green Waiv spektrometrā (StellarNet Inc, ASV), AAC analīze tika veikta ar SOLAAR MB spektrofotometru (Thermo Scientific, ASV) un Varían modeli AA240 (Varian, Krievija).

Eksperimentālo datu statistiskā apstrāde tika veikta, izmantojot variāciju-statistiskās analīzes metodi. Daļu datu apstrādāja CIM (programmatūras pakotne Sirius 6.0, Pattern Recognition Systems, a / s, Norvēģija).

P. Sivera un P. vasaras garšaugu farmakoloģiskās īpašības. Zāļu izejvielu kvalitātes rādītāji. Sivers vērmeles zāle. Veselas izejvielas. Cieti vai daļēji lapu ziedi, kas nav garāki par 45 cm un kas nesatur stiebru rupjas daļas. Stumbra pubescent, taisni, salātu un sazarotu. Radikālas un vidējās lapas ir petiolāts, platas trīsstūris, trīs reizes virsmas, iegarenas plakanas šķēlītes, 1,4 - 2,5 cm garas, 0,1 - 0,5 cm platas, puslodes veida grozi, diametrs 0,4 - 0,6 cm, plats panicate ziedkopas. Malu ziedi (aptuveni 18). Ziedi biseksuāli, daudzi, ar piltuvveida koru.

Zāļu tārps gadā. Veselas izejvielas. Cieti vai daļēji lapu ziedi, kas nav garāki par 50 cm, bez stublāja rupjām daļām. Stublājs ir tukšs, taisns, izliekts, zaļš augšanas sezonas sākumā, tumšs violets beigās. Apakšējās un vidējās stumbra lapas lapas ir ovālas vai ovālas, 1,5-7,0 cm garas uz augļa, elipsveida garumā, bez spārniem, trīs reizes pārlieku izteiktas platos segmentos, segmentos un segmentos, 0,5 līdz 0,8 cm garas, ne platas vairāk nekā 0,2 cm, grozi, kuru diametrs ir aptuveni 0,2 cm.

Veicot P. Sivera un P. zālāju anatomisko izpēti, tika konstatēti vairāki anatomiski un diagnostiski līdzekļi. Tārpu lapu lapu struktūra ir parādīta 1. tabulā. Sivers vērmeles kāts ir rupjš, iegarenas epidermas šūnas.

Ir ēteriskās eļļas dziedzeri, T-veida mati un noapaļotas stomatālās šūnas. Stublim ir saišķa tipa struktūra. Ribās ir slaidas zonas. Apļveida sijas, kas izvietotas aplī, raksturo stipri attīstīta sclerenchyma. Labi marķēts endoderms, kas sastāv no lielām, plānām sienām ar apaļu formu, cieši blakus viena otrai.

Lapas Sivera anatomiskās struktūras raksturojums un 1. lpp.

Sivers vērmeles epidermas vērmeles gadā

augšējā taisna siena taisna siena

apakšējā tinuma siena ir zema

Ustigichesky aparāta augšējā anomocītiskā tipa

zemāka anomocitiskā, stomata vairāk nekā lapas augšējā daļā

stomata ovāla forma ar lēcu stomatālās šūnas

Plaši puberticējošo matu raksturlielumi ar T-veida matiem, kas sastāv no divām, četrām šūnām, un daudzšūnu karodziņiem, ir divu veidu matu - stellātu un T-veida, ar daudzšūnu kāju

terpenoīdu saturošās struktūras ir daudzšūnu, lielas ēteriskās eļļas dziedzeri. šizogēnās tvertnes un nespecializētas parenhīmas šūnas

viengadīgu, rievotu, gandrīz tukšu kātu, iegarenu epidermas šūnu vietā. Viena gada vecuma kātiņā, kā arī s.Sivera kātiņā, kas ir puchkovy tipa konstrukcija, ir ēteriskās eļļas dziedzeri, reti mati un ovālas stomatālās šūnas, kolantera sijas raksturo attīstīta sklerenhīma, endoderms ir izteikts ar lielām, plānām sienām ar apaļu formu, kas atrodas blakus. Abos vērmeles veidos epidermas šūnas cauruļveida ziedu korellā ir plānas, gareniskas ar asiem galiem, ko raksturo liels daudzums ēterisko eļļu un matu trūkums.

Tirdzniecības rādītāji ir noteikti vairākās izejvielu partijās:

Sivers vērmeles zāle. Mitrums (ne vairāk kā 7%), kopējais pelnu daudzums (ne vairāk kā 11%), 10% sālsskābē nešķīstošs pelni (ne vairāk kā 2%), ekstrakcijas vielas (ne mazāk kā 33%), brūns un melns (ne vairāk kā 5%) ), organiskie piemaisījumi (ne vairāk kā 2%), minerālvielu piemaisījumi (ne vairāk kā 0,5%).

Zāļu tārps gadā. Mitrums ne vairāk kā 7%, kopējais pelnu daudzums (ne vairāk kā 9%), 10% sālsskābē nešķīstošie pelni (ne vairāk kā 1%), ekstrakcijas vielas (ne mazāk kā 42%), brūns un melns (ne vairāk kā 5%), t organiskais piemaisījums (ne vairāk kā 2%), minerālvielu piemaisījumi (ne vairāk kā 0,5%).

Saskaņā ar provizorisko fitokemisko analīžu rezultātiem Siversas un P. zālē atradās ēteriskās eļļas, flavonoīdi, tanīni, hidroksikinnamīnskābes, kumarīni, taukskābes un sesquiterpene laktoni.

Sivera un P. viena gada krājumi. 2. tabulā ir sniegti dati par Sivers ražu, bioloģisko (BZ) un darbības rezervēm (EZ) un ikgadējo pieaugumu dažādās Burjatijas teritorijās.

Siversas un izejvielu izejmateriāli no viena gada Burjatijas apgabalos

ražas platība (g / m2) kopējā E aizaugšana, (ha) BS (kg) EZ (kg)

env Gusinoozerskas pilsēta 58,0 ± 4,1 0,8 530,0 398,4

env c. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 ​​154,4 116,0

env c. Borāti 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0

env ar Taphar 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0

env c. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0

env Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0

Kabanska rajons 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0

Tunkinsky rajons 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0

Pribaikalskas rajons 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0

Kurumkanska rajons 370,6 ± 34,0 0,1 438,6 302,6

env c. Hurumsha 228,0 ± 10,8 0,6 14,97,6 1238,4

env Iedzīvotāju skaits 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0

env c. Sotnikovo 39.0 ± 2.1 25.00 10800.0 8700.0

Kabanska rajons 400,0 ± 27,1 30,0 136260,0 103740,0

Sivers vērmeles virszemes daļas produktivitāte un ikgadējais pētījums pētītajās biezputnēs mainās attiecīgi no 33,8 ± 2,4 līdz 500,0 ± 32,5 g / m2 un no 39 ± 2,1 līdz 500 ± 46,2 g / m2. Pētīto augu virsmas bioloģiskās un darbības rezerves ir 154,4-97320,0 kg un 116,0-73680,0 kg (Sivers vērmeles), 1,497,6177720,0 kg un 1238,4-122280,0 kg (ikgadējā vērmeles).

Ķīmiskā izpēte par P. Sivera un P. garšaugu ikgadējiem flavonoīdiem. Flavonoīdu kopējo kvantitatīvo saturu noteica Siversas un P. viengadīgo zālaugu spektrofotometriskās noteikšanas vispārpieņemta metode luteolīna-7-glikozīda izteiksmē dažādās augu attīstības fāzēs (veģetācija, ziedēšana, ziedēšana, augļi). Visaugstākais flavonoīdu saturs tika noteikts Severa un viena gada veco paraugu paraugos, kas savākti jaunā fāzē - 0,68 un 0,66%, zemākais - augļu fāzē savāktajās izejvielās - 0,31% un 0,38% (3. tabula).

Flavonoīdu daudzuma kvantitatīvais saturs luteolīna-7-glikozīda izteiksmē P. Sivera zālē un P. zālājā - vienu gadu atkarībā no veģetācijas fāzes

augu attīstības fāze, flavonoīdu daudzums luteolīna-7-glikozīda (%) izteiksmē

Vētrains Siveres vērmeles gadā

veģetācija 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04

spilgti 0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03

ziedēšana 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02

auglis 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01

Ar HPLC-MS metodi tika konstatēti šādi flavonoīdi: rutīns, luteolīns-7-glikozīds, chryo-eriol, kvercetīns Siveras zālē un viena gada vecā zāle (1. att.).

1. att. Vienu gadu ilga flavonoīdu un P. Sivera, P. hromatogramma.

Ārējās standarta metode tika izmantota rutīna, chryseriol, kvercetīna kvantitatīvā satura noteikšanai Siveras zālē un viena gada vecuma zālē (4. tabula).

Abos vērmeles, luteolīna-7-glikozīda 0,04–0,08% (Sivers) un 0,88–1,77% (n. Viens gads) daudzums ir lielākais daudzums, 0,001% kvercetīns (Sivers) un 0,0070,009% (n gadu).

Flavonoīdu kvantitatīvais saturs (HPLC-MS)

Sivers Wormwood Flavonoid kolekcija (%)

rutīna kvercetīns luteolīns-7-glikozīds

Ivolginskas rajons, okr. c. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003

Ivolginskas rajons, okr. lpp. Sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005

FLY ir viens gads un Ivolginsky rajons, okr. lpp. Sotnikovo 0.018 ± 0.001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004

Kabanska rajons, okr. c. Piestātne 0,012 ± 0,002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005

Taukskābes. Tārpu paraugi satur no 8 līdz 13 taukskābēm. Bieži abām sugām ir palmitīns (16: 0), linolskābe (18: 2p6), linolēnskābes (18: ZpZ), 56,87-82,67% (no kopējā taukskābju daudzuma) Seversā, 58,36-67,19%. n gadā (kopējās taukskābes). Papildus šīm skābēm ievērojams daudzums satur 10-oktadekēnskābi (18: 1p8) no 3,64% līdz 11,65%. Arī visos paraugos tika konstatētas 10-metil-undekāniskās (¡° 12: 0) un 12-metil-tetradekānskābes (un 15: 0) skābes, kuru saturs nepārsniedz 1%. Hromatogrammas ir parādītas 2. attēlā.

Att. 2. Taukskābju hromatogrammas (a) lpp. Sivers un (b) lpp. Viens gads (I - (16: 0), 2 - (18: 2) 6, 3 - (18: ЗПЗ), 4 - (18: 1: 8) ).

Elementa sastāvs. Siveres zālē, kas aug dažādos Burjatijas reģionos, kalcija saturs ir 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magnija - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Vislielākais kalcija un magnija saturs tiek konstatēts paraugos, kas savākti Kurumkansky rajonā, zemākais magnija saturs izejvielās no Tunkinsky rajona un kalcija augos, kas savākti Selenginsky rajonā. Dzelzs ir galvenokārt sastopams Kurumkansky reģiona augos

(141,25 ± 12,13 mg / kg), mazāk - no Selenginsky rajona (141,25 ± 12,13 mg / kg).

Cinka saturs svārstās no 23,73 ± 1,56 līdz 59,8 ± 1,56 mg / kg - п. Sivers un no 55,32 ± 0,83 līdz 66,50 + 0,89 mg / kg ir viens gads, kas ir pieņemams normālai bioķīmisko procesu darbībai. Vara saturs ir 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg-n. Siveri, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - viens gads (vajadzīgais daudzums ir no 5 līdz 30 mg / kg). Niķelis Seabera zālē satur 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, kas atbilst augu daudzumam, kas nepieciešams no 0,1 līdz 5 mg / kg. Kobalta saturs iekārtā nedrīkst pārsniegt 1 mg / kg, svina - 10 mg / kg, kadmija - 0,2 mg / kg, hroms - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). Sivers p. Kobalta saturs ir mazāks par 0,3 mg / kg, svins ir 3,19 ± 0,11 mg / kg, vienā gadā - 0,59 ± 0,02 mg / kg, kadmijs - 0,18 ± 0,02 mg / kg, hroms - 0,76 ± 0,02 mg / kg visos paraugos. Tādējādi makro un mikroelementu saturs ir tādā koncentrācijā, kas ir normāla un pietiekama augu dzīvībai svarīgo funkciju plūsmai.

Sivers vērmeles garšaugu ēteriskā eļļa. Ēteriskā eļļa no augiem tika izolēta ar farmakopeju metodi Nr. Dažādos p. Paraugos Sivers ēteriskās eļļas saturs svārstās no 0,1 līdz 1,9%. Siveras ēteriskajās eļļās, kas aug dažādās Burjatijas daļās, ir identificēti vairāk nekā 80 savienojumi.

Mēs esam izpētījuši ēterisko eļļu sastāvu, kas izolētas no Sivers vērmeles zāle, kas aug dažādās Burjatijas daļās.

(Ivolginsky (1), Selenginsky (2), Kurumkansky (3), Pribaikalsky (4.9),

Tunkinsky (5), Zakamensky rajoni (8), Irkutskas apgabals (Olkonas sala) (6) un Mongolija (7). Visaugstākā ēteriskās eļļas raža ir Sivers vērmeles, kas aug Tunkinsky un Kurumkansky reģionos (0,4%). Minimālais eļļas daudzums tika izdalīts no augiem, kas savākti Zakamenska, Pribaikalsky reģionos un Mongolijā (0,1%) (3. att.).

Ēteriskās eļļas uzkrāšanās dinamika tika pētīta atkarībā no augu attīstības fāzes (4. att.). Rezultāti parādīja, ka lielākajā daudzumā eļļa uzkrājas ziedēšanas fāzē (0,6%)

Att. 3. Ēteriskās eļļas raža p. Siveri no augšanas vietas.

augšanas un augšanas fāzes uzkrāj tādu pašu daudzumu ēteriskās eļļas (apmēram 0,3%).

1- 1,8-dānols I-terpineal-4 3-p-farmaceits 1 ■ sishna-4,11-dnen

Att. 5. Ēteriskās eļļas hromatogramma p. Sivers.

Att. 4. Ēteriskās eļļas raža p.

Siveri dažādās augu attīstības fāzēs (audzēšanas sezonā, b - jaunveidošana, c - ziedēšana,

Visas ēteriskās eļļas sastāvdaļas var iedalīt divās grupās - nemainīgas, tas ir, atrodamas eļļā visos augu attīstības posmos un sporādiski parādās (mazs). Visos Sivers ēteriskās eļļas paraugos neatkarīgi no augu audzēšanas platības 1,8-cineols (2,34–22,57%), terpineol-4 (0,964.70%), germacēns E (8,66-12,36%), P-farnezen (0,64-5,17%), Selina-4,11-diēns (0,97-4,66%), Neril-2-metilbutanoāts (4,80-8,79%) un Chamazulene (0,60-25,36%) (5. att.).

Ēteriskās eļļas, kas izolētas no stepes reģionos augošajiem augiem Pribaikalskas rajonā (25,36%), satur vismazāko hamazulēnu un mazāko - Zakamenskas rajonā (0,60%).

Ēteriskās eļļas sastāvā, kas atdalīta no augiem dažādos attīstības posmos - veģetācija, ziedēšana un ziedēšana, tika identificēti 54 savienojumi. Pastāvīgās sastāvdaļas ir 1,8-cyneols, linalols, terpineol-4, a-terpineols, p-farnezēns, selīna-4,11-dienēns, chamazulēns.

Hemazulēna saturs veģetācijas fāzē svārstās no 0,20 līdz 24,69%, no 21,34 līdz 61,91% augšanas fāzē, no 1,53 līdz 34,42% ziedēšanas fāzē, no 10,87 līdz 20,64% augļu fāzē. Sporādiski sastopamo komponentu kopums ir nozīmīgs (līdz 40 savienojumiem), vienlaikus samazinot to kvantitatīvo saturu, tāpēc ir grūti noteikt to sastāva atkarību no augu attīstības fāzes.

Lai novērtētu attīstības fāzes ietekmi uz eļļas sastāvdaļām, tika izmantots CIM (6. att.).

Att. 6. GK modelis atkarībā no kompozīcijas

ēteriskā eļļa no Siversas attīstības fāzes (I-veģetācija, 2 ziedi, 3 ziedi, 4-augļi)

šī ir viena no analīzēm

daudzdimensiju dati, kas ļauj sadalīt slēptos mainīgos lielos datu blokos un analizēt attiecības,

pastāv pētītajā sistēmā. Galvenās sastāvdaļas metodes mērķis ir aizstāt sākotnējo paraugu aprakstu, izmantojot p mainīgos lielumus jaunai formai, kas ir attēlota galveno komponentu telpā (Esbenson, 2010).

GK modelī ir iespējams atšķirt atsevišķas viena no otras norobežotas platības, kas atbilst dažādiem Sivers vērmeles attīstības posmiem, kas norāda, ka eļļas sastāvs dažādās attīstības fāzēs atšķiras nelielu savienojumu saturā.

Tādējādi dažādos Sivers attīstības posmos ēteriskās eļļas kvalitatīvais sastāvs nemainīgi sakrīt un nelielos savienojumos atšķiras.

Pētījums par augu attīstības fāzēm parādīja, ka vislielākais heksazulēna daudzums ēteriskajā eļļā Seversā ir koncentrēts ziedošos un ziedošos posmos, savukārt eļļas uzkrāšanās ziedēšanas fāzē ir lielāka nekā jaunā fāzē. Tāpēc šajos posmos mēs pētījām ēterisko eļļu uzkrāšanās īpatnības dažādās augu daļās (7. att.).

Par ziedošanas fāzi Ziedēšanas fāzē

Att. 7. Ēteriskās eļļas raža dažādās Sivers daļās.

ekstrahējamā ēteriskā eļļa no dažādām augu daļām ziedēšanas fāzē parādīja, ka ziedkopām (grozi) ir raksturīga visaugstākā ražība, lapas ir mazākas un stublāji ir minimāli. Fāzē

pīķa pļavas zālē visvairāk ir eļļa pumpuros, nedaudz mazāk lapās un minimālais eļļas daudzums kāpās.

Analizējot ēterisko eļļu no dažādām augu daļām, atklājās, ka Sivera ziedkopām un zālāju pumpuriem iegūtās eļļas sastāvdaļu sastāvs ir visdažādākais - vairāk nekā 70 sastāvdaļas, tad vairāk nekā 40 sastāvdaļas no lapām un mazāk nekā visi savienojumi, kas iegūti no eļļas, kas iegūta no stublājiem. sastāvdaļas. Ēterisko eļļu paraugu nemainīgās sastāvdaļas neatkarīgi no to atrašanās vietas ir 1,8-cyneols, linalols, terpineol-4, germacren 13, a-terpineol, a-bisabolols un chamazulene (5. tabula).

Sivers Wormwood ēteriskās eļļas pastāvīgie komponenti

sastāvdaļu saturs sastāvdaļās no visa eļļas%

ziedēšanas fāze

ziedkopas lapas stublāji pumpuri atstāj stublājus

1,8-cineols 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41

linalool 5,93 1,38 0,65 + + 3,83

terpineol-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37

a-terpineols 2,39 2,10 0,82 1,44 + 4,66

Germakren E 7,20 7,81 1,96 11,18 7,81 10,57

a-bisabolols 2,28 1,25 1,66 5,24 10,93 5,86

Chamazulene 6,23 23,02 37,11 7,81 21,17 3,51

Analīze parādīja, ka dažādās izaugsmes jomās dažādos attīstības posmos un dažādās Seversas daļās ēteriskās eļļas kvalitatīvais sastāvs sakrīt nemainīgi un atšķiras sporādiski sastopamajos savienojumos.

Ēteriskā eļļa no vērmeles gada garšauga. Tāpat kā pirmajā gadījumā, ēteriskās eļļas izvēle tika veikta ar farmakopejas metodi Nr. Ķīmisko sastāvu p. Ikgadējās ēteriskās eļļas pārstāv 40 komponenti. Pastāvīgās sastāvdaļas ir artemisia ketons (10,24–14,62%), caryofilēns (9,93–10,71%), germakrēns B (3,53–7,82%), p-selenēns (21,75–29,46%), kariofilēna oksīds (4,44–14,31%). 8).

Dažādos augu attīstības posmos no vērmeles garšauga iegūst 0,5 līdz 0,7% ēteriskās eļļas. Augstākā ēteriskās eļļas raža ziedēšanas fāzē (0,7%) (9. att.).

Visos augu attīstības posmos ēteriskās eļļas sastāvā ir artemisia ketons, karyofilēns (3-selēns, kariofilēna oksīds), un galveno komponentu kvantitatīvais saturs mainās dažādos augu attīstības posmos. un karyofilēna oksīds - ziedēšanas fāzē.

3. Ēteriskās eļļas hromatogramma 1. lpp.

Att. 9. Ēteriskās eļļas raža, lpp. Gada laikā dažādos augu attīstības posmos (veģetācija, b-bud, c-ziedēšana, p-augļi).

Ēteriskās eļļas dziedzeri augā ir nevienmērīgi sadalīti, tāpēc no dažādām augu daļām var izšķirt ēteriskās eļļas, kas atšķiras gan kvantitatīvi, gan kvalitatīvi.

Ir noteiktas ēterisko eļļu uzkrāšanās īpatnības ziedēšanas fāzē dažādās ikgadējās vērmeles daļās (10. att.).

Vairāk nekā 60 savienojumi tika konstatēti ēteriskajās eļļās no dažādām augu daļām. Pastāvīgs

eļļas no ziedkopām, lapām, kātiņiem sastāvdaļas ir artemisia spirts, p-kariofilēns, oksīds

Gada ēteriskās eļļas galvenā sastāvdaļa ir artemisia ketons - tas nav sastopams eļļā no stublājiem, lai gan tas ir puse no ziedkopām (49,14%) un gandrīz trešdaļai lapu (29,76%).

Ēterisko eļļu analīze parādīja, ka dažādās izaugsmes jomās, dažādās attīstības fāzēs un dažādās n gada daļās, kā arī n. Sievers zāle, ēteriskās eļļas kvalitatīvais sastāvs nemainīgs un atšķirīgs sporādiski sastopamās sastāvdaļās.

Izstrādāt metodi artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai vērmeles ar gada metodi HPLC-MS

Artemizinīna kvantitatīvās ekstrakcijas nosacījumu izvēle no ikgadējās vērmeles. Izstrādāt kvantitatīvu metodiku

1 2. 10. Ēteriskās eļļas raža dažādās gada daļās (1 ziedkopas, 2 lapas, 3 stublāji).

Tika izvēlēti artemizinīna noteikšanas gadījumi P. viena gada vecu ekstrakcijas apstākļu zālē, saskaņā ar kuriem artemizinīna ekstrakcija sasniedz maksimālo vērtību. Tika analizēti ekstrakti, kas iegūti, izmantojot macerācijas metodes, ultraskaņas ekstrakciju un subkritisko CO2 ekstrakciju. Kā ekstrakcijas tika izmantoti dažādi šķīdinātāji (6. tabula). Artemizinīna saturs ekstraktos, kas atdalīti ar ultraskaņas ekstrakciju un macerāciju, izmantojot dažādus šķīdinātājus, būtiski neatšķiras (0,038-0,040%). Lielākais artemizinīna daudzums (0,054%) ir ekstraktā, kas iegūts subkritiskās CO2 ekstrakcijas laikā.

Metodes un parametri, kas iegūti no viena gada veca vērmeles zālāju ekstraktiem, izmantojot dažādas ekstrakcijas metodes ______

ekstrakcijas metodes ekstrakcijas ekstrakcijas laiks / ekstrakcijas parametri artemisinīna saturs%, izteikts a.s.s.

etanols 24 stundas / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), T = 25 ° С 0,040 ± 0,002

Makerēšanas etanols 48 h / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), T = 25 ° С 0,038 ± 0,002

Heksaāns 24 h / parauga: šķīdinātāja attiecība (1: 5), T = 25 ° С 0,039 ± 0,002

etilacetāts 15 min / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), skanēšanas frekvence 50 kHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001

etanols 5 min / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), skaņas frekvence 50 KHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001

Etanola ultraskaņas ekstrakcija 10 minūtes / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), skaņas frekvence 50 KHz, T = 25 ° С 0,024 ± 0,001

etanols 15 min / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), skaņas frekvence 50 KHz, T = 25C, C 0,039 ± 0,002

etanols 20 min / izejvielu attiecība: šķīdinātājs (1: 5), skaņas frekvence 50 kHz, T = 25 ° С 0,039 ± 0,002

CO2 izdalīšana CO2 24 h.1 plūsmas ātrums 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2MPa 0,054 ± 0,003

No visām ierosinātajām ekstrakcijas metodēm ultraskaņas ekstrakcija ir optimāla (etanola ekstrakts), jo šī metode ir ātra (ekstrahēšanas laiks 15 minūtes) un pieejama ar instrumentiem.

Artemizinīna kvantitatīvās noteikšanas metode.

Tehnoloģiju izstrāde artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai gada garšaugā tika veikta ar HPLC-MS. Mēs izmantojām Agilent 1200 HPLC ar MC detektoru ("jonu slazdu") 6330, jonizācijas metodi - elektropiesārstienu. Eluācija tika veikta izokrātiskā režīmā (50% (A): 50% (B)), sākuma buferšķīduma (A) sastāvs - skudrskābes ūdens šķīdums (pH = 3) + 2 ml piesātināta amonija acetāta šķīduma, eluēšanas buferis (B) - 100% acetonitrilu. Eluenta tilpuma plūsmas ātrums ir 0,5 ml / min, injicētā parauga tilpums ir -25 μl. Jonus reģistrēja pozitīvi uzlādētu jonu (SRM) monitoringa režīmā ar masu 300 (sakarā ar NrH4 jonu pievienošanu artemisinīna molekulai), logu platumu (299301) m / z. Rezultāti tika apstiprināti ar tandēma masas spektrometriju, meitas jonu (MS2), kuras masa bija 223 m / z, ieguva no sākotnējā jonu (MS) ar masu 300 m / z.

Artemizinīna aiztures laiku un masas spektru sakritība, kas noteikta ar vienu gadu vecu zāli, izmantojot norādītā savienojuma CO šķīdumu, ļauj secināt, ka tīrais savienojums ir identisks tīram artemizinīnam (11., 12. attēls).

Att. 11. CO artemizinīna un P. gada ekstrakta hromatogramma.

iv ix язтжяауат ассс »

12. att. A) artemizinīna masas spektri, kas atrodas n gadā.

Hromatogrāfijas masas spektrometrijai kvantitatīvai analīzei tika izmantota absolūta kalibrēšanas metode. Lai noteiktu kalibrēšanas līknes koeficientu, tika sagatavoti vairāki (vismaz 20) artemizinīna kalibrēšanas šķīdumi. Šķīdumu sagatavošana tika veikta šādi: 5 * 10 "3 g artemizinīna tika nosvērts, ievietots 50 ml mērkolbā, pievienoja 25 ml acetonitrila. Kolbas saturs

rūpīgi samaisa līdz pilnīgai izšķīdināšanai, pēc tam tilpums kolbā nonāca līdz atzīmei ar destilētu ūdeni. Veikta analīze dažādos ievadītā parauga tilpumos no 1 līdz 40 μl. Tika izmērīta pīķa laukums hromatogrammās. Saskaņā ar iegūtajiem datiem tika izveidota kalibrēšanas līkne (13. att.). Pīķa laukuma vērtības tika attēlotas uz ordinātu ass, un atbilstošās artemizinīna satura (g) vērtības tika attēlotas uz abscisas ass.

No iegūtajiem datiem tika aprēķināts kalibrēšanas līknes koeficients: к = Б / х, kur к ir kalibrēšanas līknes koeficients, 5 ir analizētā šķīduma pīķa laukums, х ir artemizinīna saturs (g).

Kalibrēšanas līknes (k) koeficients ir definēts kā koeficientu k aritmētiskais vidējais lielums.

Att. 13. Artemizīna satura noteikšanas gradācija.

Artemizīna saturu viena gada vērmeles ekstraktā noteica pēc formulas: C = 5 / c, kur 5 ir artemizinīna pīķa laukums analizētajā šķīdumā, un k ir kalibrēšanas līknes koeficients. Metroloģiskie dati par kalibrēšanas līknes koeficienta noteikšanu (k) ir norādīti 7. tabulā.

Kalibrēšanas līknes koeficienta aprēķina metroloģiskie raksturlielumi

1 X Э2 Э Р ЮУ) Дх Е,%

19 1,32 * 10m 1,84 * О15 4,25 * 10 "95 2,09 1,28 * 10" 1,97 1,90 * 10 "

Artemizinīna kvantitatīvās noteikšanas rezultāti vērmeles gada ekstraktā ir parādīti 8. tabulā.

Artemizinīna kvantitatīvās noteikšanas rezultāti vērmeles ekstrakta viena gada metode HPLC-MS

Metroloģiskie raksturlielumi (n = 5, P = 95%)

0,039 0,75 * 10 "'0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "

Izstrādātā metode noteica artemizinīna kvantitatīvo saturu zālē, vienu gadu vecu ziedēšanas fāzē (9. tabula). Metode ir apstiprināta - specifiskums, precizitāte apstiprināta.

Artemizinīna saturs zālaugu biezpienā gadā

Artemizinīna laukums un savākšanas datums (%)

Ivolginskas rajons, 10 km no Sotnikovo, 08/12/2010 0.054 ± 0.003

Ivolginhiy rn, 10 km no Sotnikovo, 08/22/2011 0.027 ^.001

Ivolginskas rajons, okr. c. Oriole, 08/19/2011 0.069 ± 0.004

Kabanska rajons, okr. c. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001

Paraugos, kas savākti Ivolginsky reģionā, netālu no Oriole satur vislielāko artemizinīna daudzumu (0,069%), vismazāko - no Kabanska rajona paraugiem, okr. c. Prusaku (0,023%). Tika konstatēts, ka lielākā daļa artemizinīna augu koncentrējas ziedēšanas fāzē - 0,039%, mazākais - veģetācijas un jaunās fāzes - no 0,006 līdz 0,007%. Artemizinīna ziedkopās lapās ir - 0,029%, nedaudz mazāk - 0,021%, bet minimālais stublāju daudzums ir 0,007% (10. tabula).

Artemizinīna saturs vērmeles zālē, atkarībā no veģetācijas fāzes, dažādās augu daļās

izstrādes fāzē

veģetācija ziedošs ziedēšanas lapas ziedkopas kāti

0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002

Tādējādi optimālais laiks ikgadējai vērmeles zālaugu savākšanai ir ziedēšanas fāze, un ir ieteicams savākt visu gaisa daļu.

Visi iegūtie rezultāti ir iekļauti FS projektos par Sivers vērmeles zāli un ikgadējo vērmeles zāli.

1. Tika atklāti Siversas un P. viena gada zāle galvenie diagnostikas elementi, izstrādāti izejvielu standartizācijai nepieciešamie skaitliskie rādītāji. Ir identificētas Siversas un P. rezerves, kas aug dažādās Burjatijas Republikas teritorijās.

2. Flavonoīdu, taukskābju, makro un mikroelementu saturs Sivers n zālē un n. Zālē Viens gads. Flavonoīdi - luteolīns-7-glikozīds, rutīns, kvercetīns un hryoeriols šajos augos tika konstatēti ar HPLC-MS metodi. Galvenās taukskābes pētītajos vērmeles veidos ir palmitīnskābe, linolskābe, linolēns, 10% oktadekēnskābe ir atrodama arī nozīmīgajā vērmeles.

3. Ir konstatēts, ka augu ēterisko eļļu kvalitatīvais sastāvs paliek nemainīgs neatkarīgi no augšanas vietas un attīstības fāzes. Sivera nemainīgās sastāvdaļas ir 1,8-cyneols, terpineol-4, D germacren, p-farnesēns, Selina-4,11-diēns, neil-2-metilbutanoāts un chamazulēns, un Artemisia ketons, karyofillen, germacrene, viens gads D, p-selenēns, kariofils oksīds. Ēteriskās eļļas uzkrāšanās ziedēšanas fāzē ir lielāka (0,7%) nekā jaunā fāzē (0,3%). Lielākais chamazulēna daudzums p. Siveros uzkrājas jaunās (līdz 62%) un ziedēšanas fāzēs (līdz 34%).

4. Nosaka nosacījumus artemizinīna ekstrakcijai (ekstrakcijas veids, ekstrakcijas metode, ekstrakcijas laiks) no gada garšauga un tika konstatēts, ka maksimālā artemizinīna ekstrakcija tiek panākta ar ultraskaņas un dzesēšanas CO2 emisiju. Artemizinīna kvantitatīvas noteikšanas metode tika izstrādāta un validēta viena gada HPLC-MS metodē (relatīvā noteikšanas kļūda ± 1,21%). Ir noskaidrots, ka lielākā daļa artemizinīna gada garšaugu zālē uzkrājas ziedēšanas fāzē (0,039%).

5. Izstrādāti izejmateriālu reglamentējošie dokumenti - FS „Sivers vērmeles zāle” projekts un FS projekts „Vērpju zāle vienu gadu”.

Darba tēmas publikāciju saraksts

1. Zhigzhitzhapova, C.B. Ēteriskās eļļas Artemisia gmelinii Web ķīmiskais sastāvs. et Stechm, dzimis Centrālāzijā / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva un augu ķīmija.-2010.-№2.-С. 131-133.

2. Zhigzhitzhapova, C.B. Sivers vērmeles ēteriskās eļļas ķīmiskais sastāvs Artemisia sieversiana Willd., Audzēts Burjatijā / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Buryat State University biļetens. Ser. Ķīmija-fizika. - 2009. - Ar. 3. - 69. – 71. Lpp.

3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sivers vērmeles ēteriskās eļļas sastāvs Artemisia sieversiana Willd., Audzēts Burjatijā un Irkutskas reģionā / S.V. Žigžichapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskins // Krievijas Medicīnas zinātņu akadēmijas Sibīrijas filiāles Austrumu-Sibīrijas zinātniskā centra biļetens. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.

4. Zhigzhitzhapova, S.V. Ēteriskās eļļas sastāvs Artemisia sieversiana Willd. dažādos augu attīstības posmos / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Krievijas Medicīnas zinātņu akadēmijas Sibīrijas filiāles Austrumu-Sibīrijas zinātniskā centra biļetens. - 2011. - №1 (77). 2. daļa - 138. - 141. lpp.

5. Soktoeva, TE Ēteriskās eļļas sastāvdaļa Artemisia glauca Pall, ex Willd. Mongolijas / T.E. Soktoeva, S.V. Žigžichapova, LD

Radnaeva, B.B. Taraskin // Jauno zinātnieku biļetens. - Tomsks, 2011. -Vyp. 2. - 27. - 30. lpp.

6. Soktoeva, TE Ēteriskās eļļas Artemisia gmelinii Web ķīmiskais sastāvs. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosova-2009: XVI. konf. studentiem, absolventiem un jaunajiem zinātniekiem. - Maskava, 2009. - 37. lpp.

7. Zhigzhitzhapova, C.B. Ēteriskā eļļa no vērmeles Gmelin floras Burjatijas un Mongolijas / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // “Jauni sasniegumi augu izejvielu ķīmijā un ķīmiskajā tehnoloģijā”: IV All-Russia materiāli. zinātniski konf. - Barnaul, 2009. - 49. - 50. lpp.

8. Soktoeva, T.E. Ēteriskās eļļas Sivers wormwood Artemisia sieversiana Willd., Kas aug Burjatijas Republikā / T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Ķīmijas, biotehnoloģijas un pārtikas rūpniecības tehnoloģijas un aprīkojums”: II Vseross materiāli. zinātniski konferencē studentiem, absolventiem un jaunajiem zinātniekiem. - Biysk, 2009. - 91. – 93. Lpp.

9. Pavlova E.T. Hromatogrāfiskā atdalīšana un zāļu sastāvdaļu kvantitatīvā noteikšana ar HPLC / TE Soktoeva, T.A. Kolodins // “Reģiona ilgtspējīgas attīstības problēmas”: Krievijas jauno zinātnieku 5. skolas semināra materiāli. - Ulan-Ude, 2009. - 222-223. Lpp.

10. Zhigzhitzhapova, S.V. Centrālāzijā / S.V. augošā Artemisia L. ķīmisko sastāvu salīdzinošā analīze. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahls-Nilsens // “Datu analīzes modema metodes” Septītais ziemas simpozijs par ķīmometriju. - Sanktpēterburga, 2010. - 82. – 83.

11. Soktoeva, T.E. Centrālāzijā / TE audzētas Artemisia L. ģints polinijas ēterisko eļļu sastāva salīdzinošā analīze t Soktoeva // "Videi draudzīgas un resursu taupīšanas tehnoloģijas un materiāli": reģiona materiāli, jaunatnes zinātne. konf. no Intern. līdzdalību. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.

12. Zhigzhitzhapova, C.B. Artemisia L. / C.B. polinijas ģints ēteriskās eļļas. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // “Tradicionālās medicīnas attīstība Krievijā: pieredze, pētījumi, perspektīvas”: materiāli nauchn. konf. no Intern. līdzdalību. - Ulan-Ude, 2010. - 405. – 407. Lpp.

13. Soktoeva, T.E. Sastāvs ēteriskās eļļas brāļu un māsu vērmeles Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Baikāla Āzijas faktiskās studijas”: Intern. zinātniski Conf, - Ulan-Ude, 2010. - 309-312. Lpp.

14. Badmaeva, E.E. Ēteriskās eļļas sastāvs Artemisia macrocephala Jacq. bijušais Besss, kas aug Mongolijā / E.E. Badmaeva,

T.E. Soktoeva // “Krievijas un blakus esošo teritoriju ekoloģija”: XV International materiāli. vides aizsardzība - Novosibirska, 2010. - 325. lpp.

15. Badmaeva, E.E. Ēteriskās eļļas sastāvs Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Videi draudzīgas un resursu taupīšanas tehnoloģijas": materiāli Vseross. jaunatnes konferencē no Intern. līdzdalību. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.

16. Soktoeva, T.E. Artemizinīna ieguve no vērmeles gada Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Baikāla reģiona attīstības prioritātes un iezīmes”: Vt. Starptautiskie materiāli. zinātniski konf. - Ulan-Ude, 2011. - 127. - 128. lpp.

17. Zhigzhitzhapova, C.B. Artemisia annua L. / C.B ķīmiskais sastāvs. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // “Baikāla reģiona un blakus esošo teritoriju veģetācija”: materiāli no Vseross. zinātniski konf. - Ulan-Ude, 2011. - 152-153. Lpp.

AAS atomu absorbcijas spektrofotometrija

A.S. pilnīgi sausas izejvielas

BAS bioloģiski aktīvās vielas

GZ bioloģiskās rezerves

BH papīra hromatogrāfija

PVO Pasaules Veselības organizācija

HPLC-MS augstas veiktspējas šķidruma masas hromatogrāfija

GF valsts farmakopeja

Galveno komponentu ISC metode

CO standarta paraugs

šīs plānās kārtas hromatogrāfiju

EZ darbības rezerves

SRM Izvēlieties reakcijas uzraudzību

Autore sirsnīgi pateicas studiju vadītājam D.Sc., prof. LD Radnaeva, kā arī docents, vecākais pētnieks Krievijas Zinātņu akadēmijas Sibīrijas filiāles dabaszinības institūts Baikāls Zhigzhitzhapova C.B., Ķīmijas doktors, goda profesors Tomskas Valsts universitāte Ryzhova G.L. Palīdzību un atbalstu promocijas darba sagatavošanā.

Tas tika parakstīts drukā 11/21/2011 Formāts 60x84 1/16. Ofseta papīrs. Tilpums 1,5gab. l Cirkulācija 100. Pasūtījuma numurs 67.

Iespiests izdevniecības BNTS SB RAS poligonā. 670047 Ulan-Ude, ul. Sakhyanova, 6.

Soktoeva tēzes saturs, Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude

1. nodaļa. LITERATŪRAS PĀRSKATĪŠANA

Artemisia L. ģints pētījuma pašreizējais pētījums.

1.1. Sivers vērmeles un 12. ikgadējās vērmeles botāniskās īpašības

1.2. Ēteriskās eļļas un dabīgie azmēna augi, kas pieder pie Wormwood ģints

1.2.1. Ēterisko eļļu un dabisko azulēna 14 ķiršu muskusa ķīmiskais sastāvs

1.2.2. Wormwood ģints augu ēterisko eļļu izmantošana medicīnā

1.2. Artemizīns: atklājums, struktūra un sintēze, fizikāli ķīmiskās 31 īpašības, antiplasmodija iedarbības mehānisms

1.3. Wormwood ģints augu taukskābju sastāvs

1.4. Wormwood ģints augu fenoliskie savienojumi

1.5. Wormwood ģints augu pamatelements 38 SECINĀJUMI UZ NODAĻU

2. NODAĻA OBJEKTU UN METODU RAKSTUROJUMS 41 PĒTNIECĪBA

2.1. Studiju priekšmeti, izejmateriālu paraugi - Sivers vērmeles zāle un 41 ķiršu garšaugi

2.2. Pētniecības metodes

2.2.1. Bioloģisko pētījumu metodes

2.2.1.1. Anatomijas un diagnostikas pētījums

2.2.1.2. Resursu izpēte

2.2.2. 43 bioloģiski aktīvo vielu kvalitatīvās un kvantitatīvās noteikšanas metodes

2.2.3. Tirgvedības analīze: 50 labas kvalitātes izejvielu izveides metodes

2.2.4. Statistiskās apstrādes metodes. Galvenās sastāvdaļas metode.

3. NODAĻA. ZĀĻU HERBALIS FARMAKOGNOSTIKAS ANALĪZE 53 CIVERS

3.1. Sivers vērmeles zālaugu mikroskopiskā analīze

3.2. Sibers Wormwood krājumi

3.3. Pētījums par galveno BAS zāle brāļi un māsas vērmeles

3.3.1. Komponentu kvalitatīvais un kvantitatīvais saturs 64 Sivers vērmeles ēteriskā eļļa

3.3.1.1. Ēteriskās eļļas un 64 hamazulena uzkrāšanās ķīmiskais sastāvs un dinamika Sivers vērmeles zālē dažādos Burjatijas apgabalos

3.3.1.2. Ēteriskās eļļas un hamazulēna uzkrāšanās īpatnības 65 Siveru vērmeles zālē dažādos augu attīstības posmos

3.3.1.3. Zāles ēteriskās eļļas nelielu komponentu uzkrāšanās 71 Sivers vērmeles

3.3.1.4. Ēteriskās eļļas un chamazulēna uzkrāšanās zālē iezīmes 72 Sivermās no dažādām augu daļām

3.3.2. Flavonoīdu un tanīnu kvalitatīvais un kvantitatīvais saturs Sivers vērmeles zālē

3.3.3. Sivers vērmeles zālaugu taukskābju sastāvs

3.3.4. Augu tārpu ikgadējais sastāvs SECINĀJUMI UZ NODAĻU

4. NODAĻA. ZĀĻU ZĀĻU FARMAKOGNOSTIKAS ANALĪZE t

4.1. Zāļu vērmeles ikgadējā mikroskopiskā analīze

4.2. Garneles ikgadējie krājumi

4.3. Pētījums par galvenajiem BAS zālaugu ikriem gadā

4.3.1. Ēteriskās eļļas sastāvdaļu kvalitatīvais un kvantitatīvais saturs garšaugu vērmeles gadā

4.3.1.1. Ēteriskās eļļas uzkrāšanās ķīmiskais sastāvs un dinamika 92 zālēs no viena gada vērmēm no dažādām augšanas vietām

4.3.1.2. Ēteriskās eļļas uzkrāšanās īpatnības vērmeles zālē gada laikā dažādās attīstības stadijās un dažādās augu daļās

4.3.2. Flavonoīdu zālaugu 100 kvalitatīvā un kvantitatīvā noteikšana gadā

4.3.3. Zāļu tārpu tauku skābes sastāvs ^ ® *

4.3.4. Garšaugu vērmeles ikgadējais sastāvs

4.4. Metodes izstrāde artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai 103 vērmeles zālē ar gada metodi HPLC-MS

4.4.1. Artemizinīna kvantitatīvās ekstrakcijas nosacījumu izvēle no 103 viena gada vērmeles

4.4.2. Tehnoloģijas izstrāde artemizinīna 104 kvantitatīvai noteikšanai ar HPLC-MS

4.4.3. Artemizinīna kvantitatīvais saturs ikgadējā vērmeles no dažādām augšanas vietām

4.4.4. Artemizīna kvantitatīvā satura analīze zālē 107 vērmeles gadā dažādās attīstības fāzēs un dažādās augu daļās

5. NODAĻA. RĀDĪTĀJU UZSTĀDĪŠANA 111 IZSTRĀDĀJUMU PATĒRIŅA

5.1. Izejvielu morfometriskie rādītāji

5.2. Zāļu brāļu un māsu standartizācija

5.2.1. Merchandising indikatori zāle Sills vērmeles!

5.2.2. Sivers vērmeles garšaugu standartizācija saskaņā ar 115 hamazulelen saturu ēteriskās eļļas sastāvā

5.2.3. Sivers vērmeles zālāja glabāšanas laika noteikšana

5.3. Zāļu tārpu ikgadējā standartizācija ^ ^ ^

5.3.1. Preču indikatori zāle sagebrush gada * '^

5.3.2. Gada ķiršu ikgadējā standartizācija pēc artemizinīna satura

5.3.3. Zāļu tārpu glabāšanas laika noteikšana

Promocijas darba ievadīšana par tēmu „Farmaceitiskā ķīmija, farmakognozija”, Soktoeva, Tuyana Erdemovna, abstrakta

Tēmas atbilstība. Artemisia ģints (vērmeles) augi ir daudzsološi bioloģiski aktīvo vielu avoti, piemēram, tarragonu vērmeles Artemisia dracunculus L., vērmeles Artemisia absinthium L., tārpu Artemisia vulgaris L. plaši izmanto tautas, tradicionālajā medicīnā un pārtikas rūpniecībā. Artemisia annua L., ikgadēja vērmele, tika veiksmīgi ieviesta kultūrā daudzās valstīs, un 2001. gadā PVO ieteica to kā galveno artemizinīna avotu - pirmās kārtas ārstēšanu malārijai. Šodien valstis, kas ražo artemizinīnu, nodrošina aptuveni ceturto daļu no globālajām veselības vajadzībām [1, 2]. No viena gada vecuma tika izolēti 137 bioloģiski aktīvie savienojumi, tai skaitā 40 sesquiterpenes, 10 triterpēni, 7 kumarīni, 46 flavonoīdi, kas var kalpot par pamatu zāļu attīstībai [3]. 20. gadsimta 80. gados zinātnieku grupa [4] mēģināja attīstīt PSRS viena gada floras mežaudzes posmu ULI (Maskava). Mūsdienās Tomskas Valsts universitātē tiek veikti nozīmīgi darbi pirmā gada posteņa ieviešanai. Burjatijā n ikgadējā ir savvaļas augu suga.

Kopā ar vienu gadu vecu Burjatijā, Sivers wormwood Artemisia sieversiana Willd ir plaši izplatīta, kas ir arī daudzsološa suga. P. Sievera zālē ir flavonoīdi, ēteriskā eļļa, kumarīni [5-8]. Seabera ēteriskā eļļa ir interesanta kā Chamazulene avots, netoksisks savienojums ar pretiekaisuma, baktericīdiem, reģeneratīviem efektiem [9, 10].

Līdz šim detalizēts Bursaja ikgadējās floras Sērijas tārpu un vērmeles ķīmiskais pētījums nav veikts kā daudzsološs bioloģiski aktīvo vielu avots, tāpēc viņu pētījums ir steidzams uzdevums.

Mērķis: Sivers vērmeles Artemisia sieversiana Willd farmakoloģiskais pētījums. un vērmeles ikgadējais Artemisia annua L. kā vērtīgs bioloģiski aktīvo vielu avots.

Lai sasniegtu šo mērķi, ir nepieciešams atrisināt šādus uzdevumus:

1. Noskaidrojiet Sivera zemes virsmas anatomiskās un diagnostiskās īpašības, p. Un p. Vienu gadu, izveidojiet izejvielu preču rādītājus, novērtējiet rezerves un iespēju novākt vienu gadu un Siveres Burjatijas Republikas teritorijā;

2. Izpētīt šo augu bioloģiski aktīvo vielu galveno grupu ķīmisko sastāvu un noteikt to kvantitatīvo saturu, noteikt ēterisko eļļu un artemizinīna lokalizāciju atsevišķās augu daļās, pētīt to uzkrāšanās dinamiku attīstības fāzēs un noteikt optimālos savākšanas apstākļus;

3. Izstrādāt metodi artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai viena gada vecumā;

4. Noteikt bioloģisko aktīvo vielu satura kvalitātes rādītājus un standartus, izstrādāt zāļu dokumentācijas normatīvo dokumentāciju - Sivers vērmeles zāli un ikgadējo vērmeles zāli.

Zinātniskā novitāte. Tika izveidotas Siversas un P. gada zāles zāles diagnostikas galvenās iezīmes, izstrādāti skaitliskie rādītāji, kas nepieciešami izejvielu standartizācijai.

Tika veikts pētījums par Sivera zāle un viena gada zālāja ķīmiskais sastāvs. Tika noteikts ēterisko eļļu, flavonoīdu, taukskābju, makro un mikroelementu saturs. Flavonoīdi - luteolīns-7-glikozīds, rutīns, kvercetīns un hryoeriols šajos augos tika konstatēti ar HPLC-MS metodi. Galvenās taukskābes pētītajos vērmeles veidos ir palmitīnskābe, linolskābe, linolēns, 10% oktadekēnskābe ir atrodama arī nozīmīgajā vērmeles.

Nosaka nosacījumus artemizinīna ekstrahēšanai (ekstrakcijas veids, ekstrakcijas metode, ekstrakcijas laiks) no gada garšauga un tika konstatēts, ka maksimālā artemizinīna ekstrakcija tiek panākta ar ultraskaņas un subkritisko CO2 ieguvi. Ar HPLC-MS ir konstatēts, ka lielākais artemisinīna daudzums viena gada vecumā ir ziedkopības ziedēšanas fāzē.

Pētīja ēteriskās eļļas uzkrāšanās dinamiku atkarībā no attīstības fāzes un augu daļas. Vislielākais daudzums hazazulēna ēteriskās eļļas p. Siversa uzkrājas ziedu ziedēšanas un ziedēšanas fāzēs.

Noteiktos dokumentos iekļauti noteiktie BAS kvalitātes rādītāji.

Praktiska nozīme. Siversas apmetnes rezerves un iespējamais ikgadējais iepirkuma apjoms un viena gada norēķini Burjatijas Republikas teritorijā (Siversas apmetne - no 0,1 līdz 73,7 tonnām gadā, un viena gada norēķini no 1,2 līdz 122,3 tonnām gadā).

Ir izstrādāta metode artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai p. Grass ar gada HPLC-MS metodi. Zinātniski pamatoti ir izejvielu paraugu sagatavošanas apstākļi artemizinīna kvantitatīvai noteikšanai.

Ir veikta izejvielu standartizācija, izstrādāti FS projekti - „Sivers Wormwood Herbal” un „Wormwood One-Year Grass”.

Īstenošanas pakāpe. Ēterisko eļļu un mikroskopisko analīžu datu ieguves metode tika pārbaudīta un ieviesta Federālās valsts augstākās profesionālās izglītības valsts budžeta iestādes Buryat State University Farmācijas departamenta izglītības procesā (2011. gada 6. septembra Īstenošanas likums Nr. 1). FS projekti par Sivers vērmeles zāli un viena gada vērmeles ir sagatavoti atlīdzībai.

Darba aprobācija. Promocijas darba galvenie noteikumi tika prezentēti un apspriesti: zinātniski praktiskā konferencē ar starptautisku līdzdalību „Tradicionālās medicīnas attīstība Krievijā: pieredze, pētniecība, perspektīvas” (Ulan-Ude, 2010); 7. ziemas simpozijs par ķīmometriju "Mūsdienu datu analīzes metodes" (Sanktpēterburga, 2010); starptautiskā zinātniskā konference, kas veltīta Burjaatas Valsts universitātes 15.gadadienai "Baikālas Āzijas faktiskās studijas" (Ulan-Ude, 2010); V starptautiskā zinātniski praktiskā konference "Baikāla reģiona attīstības prioritātes un iezīmes" (Ulan-Ude, 2011); X starptautiskā zinātniski praktiskā konference "Dienvidsibīrijas un Mongolijas botānikas problēmas" (Barnaula, 2011); IV. Visu krievu konference "Jauni sasniegumi augu materiālu ķīmijā un ķīmiskajā tehnoloģijā" (Barnaula, 2009); XVI Starptautiskā studentu, maģistrantu un jauno zinātnieku konference "Lomonosova-2009" (Maskava, 2009); XV Starptautiskā ekoloģiskā studentu konference "Krievijas un blakus esošo teritoriju ekoloģija" (Novosibirska, 2010); II Visu krievu studentu, maģistrantu un jauno zinātnieku zinātniskā-praktiskā konference "Ķīmijas, biotehnoloģijas un pārtikas rūpniecības tehnoloģijas un aprīkojums" (Biysk, 2009); Visu krievu zinātniskā-praktiskā konference "Baikāla reģiona un blakus esošo teritoriju veģetācija" (Ulan-Ude, 2011); V Krievijas jauno zinātnieku skolu seminārs “Reģiona ilgtspējīgas attīstības problēmas” (Ulan-Ude, 2009); reģionālā jaunatnes zinātniskā-praktiskā konference ar starptautisku līdzdalību "Videi draudzīgas un resursu taupīšanas tehnoloģijas un materiāli" (Ulan-Ude, 2010).

Darbs tika veikts kā daļa no pētniecības projektiem: RFBR: Nr. 08-04-90202-Monga „Vidusāzijas bioloģiski aktīvo savienojumu biosintēzes biogenētisko modeļu izpēte Vidusāzijā” (2008–2009), Nr.

Augu ķīmiskais sastāvs kā Baikāla reģiona ekosistēmu stāvokļa rādītājs ”(2008-2010); starpdisciplinārs integrācijas projekts №93 "Pētniecības attīstība medicīnas ķīmijas un farmakoloģijas jomā kā zinātniskais pamats vietējo narkotiku attīstībai"; kopīgs projekts ar Mongolijas Zinātņu akadēmiju "Jaunu lipo un nanosomālu zāļu formu iegūšana, izmantojot dabiskas izejvielas"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros “Jauno zinātnieku mobilitāte” (2010), №11-03-90705-jauniešu krievu zinātnieku zinātniskais darbs (apmācība) vadošajās Krievijas Federācijas zinātniskajās organizācijās 2011 (2011).

Publikācijas. Pēc rezultātiem tika publicēti 17 zinātniskie raksti, no kuriem 3 tika publicēti Krievijas Federācijas Aizsardzības un zinātnes ministrijas Augstākās atestācijas komisijas ieteiktajos periodiskajos izdevumos.

Aizsardzībai tiek izņemti:

• Burjatijā augošo Sivera un P. anatomiskās struktūras, krājumu, autentiskuma kritēriju izpētes rezultāti;

• bioloģiski aktīvo vielu ķīmiskās izpētes rezultāti un to sezonālā uzkrāšanās dinamika;

• Siversas zemes virsmas standartizācijas pētījumu rezultāti, p.

Vairāk Raksti Par Orhidejas

Petūnijas stādīšanas laiks

  • Mēslošanas līdzekļi